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① 국세청 홈텍스에 들어간다.

https://www.hometax.go.kr/ui/pp/agitx_index.html

② 다음 화면에서 제일 왼쪽의 종합소득세를 클릭한다.

③ 종합소득세 신고 버튼을 클릭한다.

④ 일반신고서-정기신고 작성을 클릭한다.

⑤ 신고인 기본사항에서 납세자 번호에 주민번호를 입력하고 조회를 누른다.

이후 휴대전화 입력하고 기타소득에 클릭 후 다음으로 이동한다.

⑥ 나의 소득종류 찾기 페이지가 팝업으로 뜨면 기타소득에 체크하고 위 내용대로 적용하기를 클릭한다.

⑦ 기타소득에 뜨는 내역에 체크하고 선택완료를 누른 후 위 내용대로 적용하기를 클릭한다. 여러 개가 뜨면 모두 선택하고 넘어가면 된다.

⑧ 다음과 같은 화면이 뜨는데, 10번이 될때까지 아무것도 손대지 말고 다음으로 넘어간다.

⑨ 아래에 신고기한이내 납부할 세액이 뜨는데 저 금액이 돌려받을 금액이다.

⑩ 돌려받을 은행과 계좌를 입력하고 나면 신고서가 다음과 같이 뜬다. 신고서 제출하기를 누르면 끝!

1. cDNA conc. 및 primer conc.는 datasheet를 참고해 최소로 잡아 고정하고 temp.를 조절해가며 조건을 잡는다.

※ 이 때 temp. 조건은 넓게 잡는다.

Ex) Tm값 55℃ 경우 50 53 55 또는 50 52 54 등으로 잡아 실험해본다. 1℃는 큰 차이가 나지 않는다.

2. 1. 조건으로 실험해도 적정 조건이 없는 경우에는 cDNA conc. 및 Temp.를 고정하고 primer conc.를 조절해가며 조건을 잡는다.

3. 2. 조건으로 실험해도 적정 조건이 없는 경우에는 primer conc. 및 Temp.를 고정하고 cDNA conc.를 조절해가며 조건을 잡는다.

※ 주의사항!!

모든 경우, multi peak가 뜨지 않는 조건을 사용해야 한다.

Multi peak가 뜨는 이유는 PCR condition or primer design의 문제일 수 있다.

(primer dimer일수도 있고 non-specific일수도 있다)

Condition의 문제라면 condition을 바꿔 실험하면 되고, design의 문제라면 primer를 다시 짜야 한다.

(dimer문제일 경우 primer conc.를 낮춰 사용하면 해결됨. non-specific일 경우 Tm을 올려 실험해야 함)

1. 프로그램 사용하기

 pcr 프로그램상에서 나오는 RQ값을 바로 이용해 그래프를 만들 수 있다.

2. 계산식을 통해 RQ값 얻기

① 프로그램상에서 나온 data를 엑셀로 옮긴다.

(여기서 사용하는 값은 CT mean)

② 각각 sample에서 housekeeping gene의 CT값을 빼서 dCT의 값을 구한다.

(MSC는 MSC의 B-actin, DF는 DF의 B-actin값을 빼야 함)

③ 실험한 그룹의 dCT값에서 control 그룹의 dCT값을 빼 ddCT값을 얻는다.

(MSC는 control group이기 때문에 ddCT의 값이 0이 된다)

④ 2^(-ddCT)식을 이용해 RQ값을 구한다. 프로그램으로 구해진 RQ값과 동일한 것을 확인할 수 있다.

⑤ RQ값으로 그래프를 그린다.