media change(부유 세포)

1. 목적

cell에 새로운 영양소 공급

2. 사용 재료

기구: pipette, tip, pipette aid, glass pipette, conical tube

시약: HBSS, media

3. 방법

① flask에 HBSS를 추가 후 washing한다.

② washing한 media를 conicla tube로 옮기고 centrifuge 한다.

③ cell을 suction하지 않게 주의하고, 상층액을 suction한다.

④ 적당량의 media를 pellet과 섞어준다.

⑤ trypan blue를 사용해 cell counting한다.

⑥ density를 계산하고, 적정량을 dish에 골고루 seeding한다.

4. 고찰

① rpm, rcf 변환 및 차이

rpm(rev per min)은 분당 회전수이며, 속도의 단위다. 로터의 길이가 다를 시 같은 rpm이라도 원심력이 다르다.

② HBSS pH

HBSS의 phenol red를 통해 pH를 짐작할 수 있다.

HBSS는 붉은색을 띠는데, 세포호흡으로 발생한 이산화탄소가 HBSS에 녹아 pH가 낮아지면(산), 노란색을 띤다.

pH가 높아지면(염기) 자주색을 띤다.

③ trypan blue 염색 원리

trypan blue 입자는 확산을 통해 세포 내로 유입된다. 살아있는 세포는 exocytosis 작용을 통해 trypan blue를 세포 밖으로 배출해 염색되지 않는다.

죽은 세포는 exocytosis 작용을 할 수 없어 파란색으로 염색된다.